Polysciences全國代理-上海鼎桑
更新時間：2024-08-14
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| 產地 | 進口 | 加工定製 | 否 |
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PEI轉染手冊(ce)
轉染操作流程：
1、細胞傳(chuan) 代：
轉染前24h內(nei) 分離293T細胞至含10％胎牛血清的DMEM培養(yang) 基 中進行傳(chuan) 代培養(yang) ，接種密度如下：
6孔板：0.5x106細胞
10cm培養(yang) 皿：4.0x106細胞
15cm培養(yang) 皿：9.0x106細胞
2、轉染
轉染前將所有試劑置於(yu) 室溫。
2.1質粒DNA的稀釋
在無菌試管中，用無血清的DMEM W / O酚紅培養(yang) 基（濃度為(wei) 10％）稀釋質粒DNA（ug）。病毒包裝體(ti) （psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重組質粒DNA的稀釋比例分別為(wei) 4:2:1。
6孔板：200ul+3ug的DNA
10cm培養(yang) 皿：1ml+7-8ug的DNA
15cm培養(yang) 皿：2ml+11-12ug的DNA
2.2 轉染複合體(ti) 形成
將PEI（1ug/uL）加入已稀釋的總DNA中，PEI與(yu) DNA（ug）的混合比率為(wei) 3:1。加入後立即渦旋混合。
6孔板：9ul PEI複合體(ti) （1ug/ul）=9ug
10cm培養(yang) 皿：21ul PEI複合體(ti) （1ug/ul）=21ug
15cm培養(yang) 皿：33ul PEI複合體(ti) （1ug/ul）=33ug
將添加到細胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鍾。
4、收獲轉染細胞
轉染後48小時內(nei) 收獲轉染細胞/或病毒上清。
試劑的配製：
PEI（1ug/ul） Polysciences（CAT＃23966-2配製成儲(chu) 液：)
1、將無內(nei) 毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI，冷卻到室溫。
2、調整pH值至7.0，用0.22um的濾器過濾消毒，分裝後儲(chu) 存在-20℃。工作液可保持在4℃
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