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轉染試劑線性PEI溶液的配製（1mg/ml）

聚乙烯亞(ya) 胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亞(ya) 胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個(ge) 碳個(ge) 原子，即每“第三個(ge) 原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(proton sponge)體(ti) 。PEI，可用作轉染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒並轉染真核細胞。有實驗證明，分子量為(wei) 25000的線性PEI即Polysciences 23966轉染效率zui高。

下麵將主要介紹polysciences 線性PEI(#23966)的產(chan) 品特性及其溶液的配製過程。

1. 產(chan) 品特性:

產(chan) 品名稱：線性聚乙烯亞(ya) 胺(PEI)

2. 溶液配製

此指導說明書(shu) 是經polysciences公司研究，測試及其客戶反饋的後編寫(xie) 的。下麵推薦一種簡單適用而的方法，講述如何配製濃度為(wei) 1mg/mL的轉染試劑的配製。

材料：

1g #23966、1L 純水（Milli-Q®純水，注射用水（WFI），或類似的生物級水）、12 M鹽酸、10 M氫氧化鈉、一次性0.1-0.2µm PES真空無菌過濾器、無菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。

器材：

1 L 玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、核準pH計、2支1 mL塑料移液管、托盤、聚四氟乙烯（PTFE）攪拌棒、真空泵

配製過程：

1g #23966——900mL水溶解——攪拌、加熱（60-80°C）——加HCl調pH到2.0左右——蓋上燒杯，攪拌3h（直至粉末*溶解）——冷卻至室溫——加NaOH調pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水補足至1L——真空過濾消毒——分裝，-20°C保存。

備注：加熱或加酸都有助於(yu) PEI溶解。當然酸可能不用加那麽(me) 多，詳細用量可試加一點攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到pH那麽(me) 低。

試劑儲(chu) 存：

冷凍部分溶液可在-20°C保存長達一年；部分解凍的溶液可在4°C保存2周，不可反複凍融。

粉末儲(chu) 存：

未開封的粉末有效期兩(liang) 年。可在室溫下保存直至使用。

轉染操作流程：(瞬時轉染方法) 轉染效率（部分數據參考，本數據來源於(yu) 網絡，不作為(wei) 售後投訴依據）

1. 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化細

胞並計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yang) 的器皿，每個(ge) 孔置

入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 複合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其

升至室溫。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yang) 基稀釋適

量 DNA。用同樣的培養(yang) 基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性 PEI 轉

染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉染試劑滴

加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻後，室溫靜置 10~25 min 以

形成 DNA-PEI複合物。當溶液體(ti) 積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14

mL 離心管。

3. 轉染細胞： 直接向每個(ge) 孔中加入 DNA-PEI 複合物並輕輕渦旋培養(yang) 板/培養(yang) 皿。在

無血清條件下轉染時，去除生長培養(yang) 基，替換成無血清培養(yang) 基，然後滴 DNA-PEI 複

合物。轉染 3 h 後，添加½體(ti) 積的包含 30%血清的生長培養(yang) 基。

4. 孵育細胞和分析結果： 在 CO2 培養(yang) 箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉

染後快 的話7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

細胞種類 中文名稱 PEI 轉染效率

HEK293 人胚腎細胞 90%-95%

293-T 人胚腎細胞 90%-95%

CHO-K1 倉(cang) 鼠卵巢細胞 80%-90%

U251 人源神經膠質瘤細胞 80%-90%

Hela 人源宮頸ai細胞 70%-80%

COS7 猴 SV40 轉化腎細胞 70%-80%

HepG2 人源肝癌細胞 70%-80%

NIH/3T3 小鼠胚胎成纖維細胞 60%-70%

膠質瘤幹細胞 人源膠質瘤幹細胞 60%-70%

Patu8988 人源胰腺癌細胞 60%-70%

U2OS 人源骨肉瘤細胞 60%-70%

轉染試劑和 DNA 配比數據

細胞型號 培養(yang) 基 每孔細胞數 DNA 的量 轉染試劑量 和培養(yang) 基混合 4-6h

293H DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293FT DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293E DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293F DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

COS7 DMEM 1.5×10

4

0.4µg 0.5µL DMEM+10%FBS

hela DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL 1640+15%FBS

Caco2 MEM 3.5×10

4

0.3µg 0.75µL MEM+10%FBS

BHK21 MEM 2×10

4

0.2µg 0.5µL MEM+10%FBS

CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×10

4

0.5µg 0.5µL DMEM+HT+pro +10%FBS

RAW264.7 DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM +10%FBS

MCF7

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat

2×10

4

0.1µg 0.25µL

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat+10%FBS

SW480 IMDM 3×10

4

0.4µg 0.5µL IMDM +10%FBS

MDCK DMEM 4×10

4

0.6µg 1µL DMEM+10%FBS

CHO-K1 IMDM+Pro 3×10

4

0.2µg 0.5µL IMDM+Pro +10%FBS

HepG2 DMEM 3×10

4

0.5µg 0.75µL DMEM+10%FBS

A549 DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL DMEM+10%FBS

NIH/3T3 DMEM 1.5×10

4

0.1µg 0.75µL DMEM+10%FBS

vero DMEM 3×10

4

0.3µg 0.75µL DMEM+10%FBS

sf9 SIM SF 5×10

4

0.4µg 0.75µL SIM SF+10%FBS